Plásmido Doble Nickase (h) cystatin D: sc-405049-NIC

CST5 codifica la cistatina D, una cistatina tipo 2 secretada que inhibe proteasas de cisteína lisosomales y extracelulares, como las catepsinas, contribuyendo así a regular la proteólisis, el procesamiento de antígenos y la homeostasis de la barrera epitelial. Al modular la actividad de las catepsinas, la cistatina D puede influir en el recambio de la matriz extracelular y en vías de señalización dependientes de proteasas relevantes para la remodelación tisular y las respuestas inflamatorias. La alteración de la expresión de CST5 o el desequilibrio entre proteasas e inhibidores se ha asociado con cambios en el comportamiento del microambiente tumoral, la proteólisis vinculada a la invasión y la fisiopatología de las mucosas, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de proteostasis y biología epitelial. Por tanto, CST5 es una diana útil para dilucidar cómo el control de las catepsinas moldea la diferenciación celular, las respuestas al estrés y la comunicación intercelular en sistemas modelo humanos.

cystatin D El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CST5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CST5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CST5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CST5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.