Cyp3a11 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419922-ACT

Das murine Cyp3a11 kodiert eine Cytochrom‑P450‑Monooxygenase, die den oxidativen Metabolismus von Xenobiotika und endogenen Substraten katalysiert und so zur hepatischen Clearance sowie zur chemischen Homöostase beiträgt. Die Aktivität von Cyp3a11 ist an der Phase‑I‑Arzneistoffmetabolisierung beteiligt und steht in Wechselwirkung mit Signalwegen nukleärer Rezeptoren, darunter PXR und CAR, die transkriptionelle Antworten auf Exposition und Stoffwechselzustand koordinieren. Durch die Beeinflussung der Biotransformation von Verbindungen und Steroiden wirkt Cyp3a11 auf pharmakokinetische Variabilität und die Anfälligkeit für hepatotoxische Schädigungen unter metabolischem oder inflammatorischem Stress. Eine veränderte Regulation von Cyp3a11 ist daher relevant für Studien zu Arzneimittelwechselwirkungen, Leberfunktion und Gen‑Umwelt‑Mechanismen, die toxikologische Phänotypen in Mausmodellen beeinflussen.

Cyp3a11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cyp3a11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cyp3a11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cyp3a11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cyp3a11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cyp3a11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cyp3a11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cyp3a11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cyp3a11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cyp3a11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.