CYP2W1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404238-ACT

O CYP2W1 humano codifica uma monooxigenase do citocromo P450 que catalisa o metabolismo oxidativo de diversos substratos endógenos e xenobióticos, contribuindo para o equilíbrio redox celular e para a bioativação/detoxificação. Como uma enzima heme associada ao retículo endoplasmático (RE), o CYP2W1 participa de processos metabólicos de fase I que se cruzam com a oxidação de lipídios, o manejo de espécies reativas de oxigênio e vias subsequentes de conjugação. Sua expressão é tipicamente baixa na maioria dos tecidos adultos, mas foi relatada como elevada em certos contextos tumorais, tornando-o relevante para o estudo da reprogramação metabólica associada ao câncer e de programas atípicos de expressão de P450. Assim, a atividade e a regulação do CYP2W1 são úteis para investigar sinalização de resposta a xenobióticos, vulnerabilidades metabólicas e interações gene–ambiente em modelos de células humanas.

CYP2W1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYP2W1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP2W1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYP2W1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYP2W1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP2W1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYP2W1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP2W1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP2W1 em células tumorais com expressão de CYP2W1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.