CYP11B2 Double Nickase Plasmid (h): sc-405281-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP11B2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP11B2 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYP11B2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYP11B2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP11B2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405281-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP11B2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405281-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP11B2 kodiert die Aldosteronsynthase, ein mitochondriales Cytochrom‑P450‑Enzym, das in Zellen der Zona glomerulosa der Nebennierenrinde die abschließenden Oxidationsschritte katalysiert, durch die 11‑Desoxycorticosteron zu Aldosteron umgewandelt wird. Seine Aktivität verknüpft die aus Cholesterin abgeleitete Steroidbiosynthese mit dem Renin‑Angiotensin‑Aldosteron‑System und integriert dabei den mitochondrialen Elektronentransfer, die hämabhängige Monooxygenierung sowie die endokrine Kontrolle der Elektrolyt‑ und Blutdruckhomöostase. Eine fehlregulierte Expression oder Aktivität von CYP11B2 ist mit Zuständen eines Aldosteronüberschusses assoziiert, darunter der primäre Aldosteronismus und aldosteronproduzierende Nebennierenadenome, und trägt zur kardiovaskulären und renalen Pathophysiologie bei. Als Marker und treibender Faktor der Mineralokortikoid‑Biosynthese wird CYP11B2 intensiv in Studien zur Differenzierung von Nebennierenzellen, zur Angiotensin‑II‑Signalübertragung und zum Steroidstoffwechsel‑Flux untersucht.
CYP11B2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP11B2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP11B2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP11B2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP11B2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.