Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP11B1: sc-403040-ACT

CYP11B1 code la 11β-hydroxylase du cytochrome P450, une monooxygénase mitochondriale qui catalyse des étapes tardives de la stéroïdogenèse surrénalienne, notamment la conversion du 11‑désoxycortisol en cortisol et de la 11‑désoxycorticostérone en corticostérone. Cette enzyme intervient dans des réactions d’oxydo‑réduction dépendantes de l’hème nécessitant un transfert d’électrons depuis l’adrénodoxine et l’adrénodoxine réductase, reliant ainsi le métabolisme mitochondrial à la production hormonale. L’activité de CYP11B1 influence la régulation de l’axe hypothalamo‑hypophyso‑surrénalien et les programmes transcriptionnels en aval sensibles aux glucocorticoïdes et aux minéralocorticoïdes. Une expression ou une fonction altérée de CYP11B1 est associée à des phénotypes d’hyperplasie congénitale des surrénales et contribue à une dérégulation endocrinienne pertinente pour la modélisation des troubles surrénaliens et des états pathologiques liés aux stéroïdes.

CYP11B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP11B1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP11B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP11B1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP11B1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP11B1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP11B1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP11B1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP11B1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP11B1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.