Plásmido Doble Nickase (h) CYB5R3: sc-404764-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CYB5R3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CYB5R3 (h) y el plásmido de doble nickasa CYB5R3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CYB5R3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CYB5R3 Anticuerpo (G-11): sc-398043
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CYB5R3 | sc-404764-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CYB5R3 | sc-404764-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYB5R3 codifica la citocromo b5 reductasa 3, una flavoproteína dependiente de NADH que transfiere electrones al citocromo b5 y a otros aceptores para sostener el metabolismo del hemo y de los lípidos. Contribuye a la homeostasis redox celular e influye en vías como la desaturación/elongación de ácidos grasos, la biosíntesis de colesterol y la protección frente al estrés oxidativo mediante el mantenimiento de cofactores reducidos. La actividad de CYB5R3 también se vincula con la reducción de metahemoglobina en eritrocitos y con una regulación más amplia de los procesos de transferencia de electrones en la mitocondria y el retículo endoplásmico. La alteración genética o funcional de CYB5R3 se ha asociado con metahemoglobinemia y fenotipos relacionados de desequilibrio redox, lo que lo hace relevante para estudiar deficiencias en la transferencia de electrones y respuestas al estrés metabólico.
CYB5R3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYB5R3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYB5R3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYB5R3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYB5R3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.