Plasmide Double Nickase (h) CXCR-4: sc-400254-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CXCR-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CXCR-4 Double Nickase (h) et le plasmide CXCR-4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CXCR4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CXCR-4 Antibody (4G10): sc-53534
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CXCR-4 | sc-400254-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CXCR-4 | sc-400254-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CXCR4 code le récepteur de chimiokines CXCR-4, un RCPG à sept domaines transmembranaires qui se lie à CXCL12/SDF-1 pour réguler la chimiotaxie, l’adhésion cellulaire et les signaux de survie. L’activité de CXCR-4 se couple aux voies des protéines G et de la β-arrestine, activant des cascades en aval telles que PI3K/AKT, MAPK/ERK et les flux calciques médiés par PLC afin de coordonner le remodelage du cytosquelette et la migration directionnelle. Cet axe est central pour le trafic des leucocytes et la rétention des cellules hématopoïétiques dans les niches de la moelle osseuse, et il est fréquemment étudié dans les travaux sur la dynamique des cellules immunitaires et la dissémination des cellules tumorales. La dérégulation de l’expression et de la signalisation de CXCR4 est associée à des réponses inflammatoires altérées ainsi qu’à des phénotypes d’invasion et de métastase liés au cancer, ce qui en fait une cible courante pour l’analyse mécanistique des voies de signalisation.
CXCR-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CXCR4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CXCR4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CXCR4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CXCR4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.