CXCR-4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400254-ACT

CXCR4 kodiert den Chemokinrezeptor CXCR-4, einen Sieben-Transmembran-GPCR, der CXCL12/SDF-1 bindet und dadurch Chemotaxis, Zellpositionierung und das Homing in Gewebe innerhalb hämatopoetischer, immunologischer und stromaler Kompartimente reguliert. Die CXCR-4-Signalübertragung aktiviert nachgeschaltete Signalwege, darunter die Gαi-vermittelte Hemmung von cAMP, PI3K–AKT, MAPK/ERK, PLC–PKC sowie Kalziumflüsse, und integriert so Signale, die Migration, Überleben und Adhäsion beeinflussen. Eine fehlregulierte CXCR4-Aktivität wird mit veränderter Leukozytentrafficking, inflammatorischen Mikroumgebungen und aberranten Programmen der Zellmotilität in Verbindung gebracht. Diese Funktionen machen CXCR4 zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für die Untersuchung rezeptorgeleiteter Migration, Nischeninteraktionen und mikroumgebungsgetriebener Phänotypen in humanen Zellmodellen.

CXCR-4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CXCR4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CXCR-4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CXCR4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CXCR4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CXCR-4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CXCR4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CXCR-4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CXCR-4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CXCR4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.