Plasmide CRISPR d'Activation (h) CTGF: sc-400091-ACT

Le facteur de croissance du tissu conjonctif (CTGF/CCN2) est une protéine matricellulaire sécrétée qui intègre le remodelage de la matrice extracellulaire aux voies de signalisation des facteurs de croissance afin de réguler l’adhésion, la migration et la prolifération cellulaires, ainsi que les programmes géniques fibrogènes. Le CTGF est inductible par le TGF-β et par des signaux mécaniques, et il module des voies incluant la signalisation SMAD, l’adhésion médiée par les intégrines, ainsi que des interactions avec les voies MAPK et la mécanotransduction YAP/TAZ. Par ces fonctions, le CTGF façonne la réparation tissulaire et le remodelage stromal en influençant le dépôt de collagène, l’activation des myofibroblastes et les réponses angiogéniques. Une expression dérégulée du CTGF est associée à la fibrose pathologique et à la progression du stroma associé aux tumeurs, ce qui en fait un marqueur moléculaire couramment utilisé et un acteur clé dans les études de biologie de la matrice extracellulaire.

CTGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CTGF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CTGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CTGF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CTGF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CTGF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CTGF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CTGF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CTGF dans les cellules tumorales présentant une expression de CTGF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.