Plasmide Double Nickase (h) CTCF: sc-401245-NIC

CTCF code le facteur de liaison CCCTC, une protéine multifonctionnelle à doigts de zinc se liant à l’ADN, qui organise l’architecture 3D du génome en établissant des frontières de chromatine et en régulant la communication entre enhancers et promoteurs. Il coopère avec la cohésine pour former et maintenir des domaines d’association topologique (TAD), influençant le contrôle transcriptionnel, le calendrier de réplication et les réponses aux dommages de l’ADN. Par des mécanismes d’isolation et de bouclage à longue distance, CTCF module des programmes d’expression génique spécifiques de lignée et le maintien des états épigénétiques. Une altération de la fonction de CTCF ou de ses paysages de liaison est associée à une organisation de la chromatine dérégulée observée dans des troubles du développement et divers cancers, ce qui en fait une cible largement utilisée pour étudier la régulation génique liée à la topologie du génome.

CTCF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CTCF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CTCF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CTCF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CTCF.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.