cryptdin 3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419984

Descripción general

Defa3 codifica la criptidina 3, una α-defensina derivada de las células de Paneth que contribuye a la defensa inmunitaria innata en el intestino delgado del ratón al dirigirse directamente a las membranas microbianas y modular la composición de la microbiota intestinal. Como parte de la biología de los péptidos antimicrobianos, la criptidina 3 participa en el mantenimiento de la barrera epitelial y en la homeostasis inmunitaria de la mucosa junto con vías de reconocimiento de patrones y de señalización inflamatoria. Las alteraciones en la producción de defensinas por las células de Paneth se han asociado con disbiosis e inflamación intestinal, lo que hace que Defa3 sea relevante para estudios mecanísticos de las interacciones huésped–microbio. La perturbación de Defa3 también es útil para examinar cómo los péptidos antimicrobianos influyen en la resistencia a la colonización bacteriana y en las respuestas de estrés epitelial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO cryptdin 3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Defa3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Defa3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Defa3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cryptdin 3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Defa3 para la investigación de la señalización de cryptdin 3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Defa3 críticos para la función de cryptdin 3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Defa3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido cryptdin 3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido cryptdin 3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Defa3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cryptdin 3 (m) y el plásmido HDR cryptdin 3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Defa3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Defa3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.