Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CRF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400770
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CRF El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CRF, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CRF Anticuerpo (2B11): sc-293187
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CRF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400770 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La hormona liberadora de corticotropina (CRH) codifica el neuropéptido CRF, un regulador central del eje hipotálamo‑hipófisis‑suprarrenal (HPA) que coordina las respuestas endocrinas, autonómicas y conductuales al estrés fisiológico. Tras su secreción, el CRF señala principalmente a través de CRHR1/CRHR2 para activar las vías Gs–adenilil ciclasa–cAMP/PKA, modulando la transcripción dependiente de CREB y las salidas neuroendocrinas posteriores, incluida la liberación de ACTH. La actividad de CRH/CRF también se integra con la señalización inflamatoria y metabólica, moldeando la producción de citocinas y la homeostasis energética en el cerebro y en tejidos periféricos. La desregulación de la expresión de CRH o de la señalización de los receptores de CRF se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos relacionados con el estrés y con trastornos inflamatorios y gastrointestinales, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del diálogo entre estrés e inmunidad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CRF (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CRH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CRH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CRH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CRF.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CRH para la investigación de la señalización de CRF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CRH críticos para la función de CRF
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CRH para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CRF CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CRF CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CRH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CRF (h) y el plásmido HDR CRF (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CRH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CRH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.