Plasmide Double Nickase (h) CRF-BP: sc-403849-NIC

CRHBP code la protéine de liaison au facteur de libération de la corticotropine (CRF-BP), une glycoprotéine sécrétée qui se lie à la CRH et aux urocortines apparentées afin de réguler la biodisponibilité des ligands et leur interaction avec les récepteurs au sein de l’axe hypothalamo–hypophyso–surrénalien (HHS). En tamponnant les peptides libres de la famille CRH, la CRF-BP module les voies de signalisation en aval de CRHR1/CRHR2, qui convergent vers le cAMP/PKA ainsi que vers des programmes transcriptionnels contrôlant la réactivité au stress, la sécrétion neuroendocrinienne et le tonus inflammatoire. L’expression de CRHBP est marquée dans le cerveau et dans des tissus périphériques, où elle peut influencer la communication neuro-immune et l’homéostasie endocrinienne. La dérégulation de la signalisation CRH–urocortine et des profils d’expression de CRHBP a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques liés au stress, à des altérations de la régulation métabolique et à des processus inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des circuits du stress et de la biologie périphérique de la CRH.

CRF-BP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRHBP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRHBP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRHBP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRHBP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.