Plasmide Double Nickase (h) CRABP-II: sc-402978-NIC

CRABP2 code la protéine de liaison à l’acide rétinoïque cellulaire II (CRABP-II), un transporteur cytosolique de haute affinité qui se lie à l’acide tout-trans rétinoïque et régule sa disponibilité intracellulaire ainsi que son acheminement vers le noyau. En orientant l’acide rétinoïque vers les récepteurs de l’acide rétinoïque (RAR), CRABP-II influence des programmes transcriptionnels qui contrôlent la différenciation, la prolifération, l’homéostasie épithéliale et l’expression de gènes liés à la fonction barrière. La signalisation rétinoïde dépendante de CRABP2 s’entrecroise avec des voies qui régulent le contrôle du cycle cellulaire, l’inflammation et l’organisation du développement, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer des réponses à l’acide rétinoïque spécifiques au contexte. Des altérations de l’expression de CRABP2 et de la prise en charge des rétinoïdes ont été rapportées dans divers domaines de recherche en cancérologie, dermatologie et métabolisme, étayant les études sur la dérégulation de la différenciation et la plasticité transcriptionnelle.

CRABP-II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRABP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRABP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRABP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRABP2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.