Plasmide CRISPR d'Activation (h) CRABP-II: sc-402978-ACT

CRABP2 code la protéine 2 de liaison à l’acide rétinoïque cellulaire (CRABP‑II), un transporteur cytosolique qui se lie avec une forte affinité à l’acide rétinoïque tout‑trans et en régule la disponibilité intracellulaire ainsi que la signalisation en aval. En contrôlant l’acheminement de l’acide rétinoïque vers les récepteurs nucléaires de l’acide rétinoïque (RAR), CRABP‑II module des programmes transcriptionnels qui gouvernent la différenciation épithéliale, la biologie des kératinocytes et l’organisation du développement. Une expression altérée de CRABP2 a été associée à une dérégulation de la signalisation des rétinoïdes dans des phénotypes liés au cancer, notamment des modifications de la prolifération, de la migration et des états de différenciation. Ce gène est donc pertinent pour l’étude des réseaux géniques sensibles aux rétinoïdes, du tamponnement des ligands et du remodelage transcriptionnel dépendant du contexte.

CRABP-II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CRABP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CRABP-II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CRABP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CRABP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CRABP-II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CRABP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CRABP-II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CRABP-II dans les cellules tumorales présentant une expression de CRABP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.