Plásmido CRISPR de Activación (h2) CRABP-I: sc-405485-ACT-2

El CRABP1 humano codifica la proteína celular de unión al ácido retinoico I (CRABP-I), un transportador citosólico de alta afinidad que actúa como amortiguador y vehículo del ácido retinoico todo-trans para modular su disponibilidad y, con ello, la señalización dependiente de retinoides. Al regular la distribución y el metabolismo del ácido retinoico, CRABP-I influye en programas transcripcionales gobernados por los receptores de ácido retinoico e interactúa con vías que controlan la diferenciación celular, la proliferación y la organización del patrón durante el desarrollo. La alteración de la expresión de CRABP1 o del manejo de retinoides se ha implicado en la desregulación de la señalización por ácido retinoico observada en múltiples cánceres y en contextos del neurodesarrollo o de la neurodegeneración, donde la homeostasis de los retinoides afecta el destino celular y las respuestas al estrés. Las herramientas de edición génica de CRABP1 permiten estudios mecanísticos de la dinámica del transporte de retinoides, de los transcriptomas sensibles al ácido retinoico y del crosstalk entre vías en modelos celulares humanos relevantes.

CRABP-I El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CRABP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CRABP-I El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CRABP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CRABP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CRABP-I. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CRABP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CRABP-I en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CRABP-I en células tumorales con expresión de CRABP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.