Plásmido CRISPR de Activación (h) COX5a: sc-405025-ACT

COX5A codifica la subunidad 5A de la citocromo c oxidasa (COX5a), un componente del Complejo IV mitocondrial codificado en el núcleo que favorece la transferencia de electrones al oxígeno y una fosforilación oxidativa eficiente. Al modular el ensamblaje y la actividad de la citocromo c oxidasa, COX5a influye en el flujo de la cadena respiratoria, el potencial de membrana mitocondrial y la producción de ATP, con efectos posteriores sobre la señalización de ROS y la adaptación metabólica. La alteración de la función del Complejo IV es ampliamente relevante para la disfunción bioenergética mitocondrial, que se ha implicado en la neurodegeneración, fenotipos cardiometabólicos y la remodelación metabólica de células tumorales. Por ello, la expresión de COX5A y la integridad del Complejo IV se examinan con frecuencia en estudios sobre respuestas al estrés mitocondrial, adaptación a la hipoxia y decisiones de destino celular dependientes de la energía.

COX5a El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COX5A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COX5a El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COX5A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COX5A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COX5a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COX5A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COX5a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COX5a en células tumorales con expresión de COX5A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.