Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cox-2 Double Nickase Plasmid (m): sc-422489-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cox-2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cox-2 Double-Nickase-Plasmid (m) und Cox-2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Ptgs2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cox-2: sc-376861
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cox-2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-422489-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cox-2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422489-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Ptgs2** kodiert die Cyclooxygenase-2 (Cox-2), ein induzierbares, geschwindigkeitsbestimmendes Enzym, das Arachidonsäure in Prostaglandin H2 umwandelt und damit nachgeschaltete Prostanoide wie PGE2 bereitstellt, die den Gefäßtonus, die Schmerzsensibilisierung und das Verhalten von Immunzellen modulieren. Die Cox-2-Expression wird durch entzündliche Signale rasch hochreguliert, darunter NF-κB- und MAPK-Signalwege nachgeschaltet an Zytokine und Toll-like-Rezeptoren, wodurch die Aktivierung der angeborenen Immunität mit der Biosynthese lipidischer Mediatoren verknüpft wird. Über ihren Einfluss auf die Prostaglandin-Signalgebung beeinflusst Cox-2 die Rekrutierung von Leukozyten, die Zytokinproduktion, die Angiogenese und den Gewebeumbau. Eine fehlregulierte Ptgs2-Aktivität wird umfangreich in Modellen chronischer Entzündung, tumorfördernder Mikroumgebungen sowie in neuroinflammatorischen und metabolischen Stresskontexten untersucht.
Cox-2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Ptgs2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Ptgs2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Ptgs2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Ptgs2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.