Plasmide Double Nickase (h) COL7A1: sc-401235-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) COL7A1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide COL7A1 Double Nickase (h) et le plasmide COL7A1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant COL7A1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: COL7A1 Antibody (4D2): sc-33710
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) COL7A1 | sc-401235-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) COL7A1 | sc-401235-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL7A1 code le collagène de type VII (COL7A1), un composant structural essentiel des fibrilles d’ancrage qui fixent la membrane basale de l’épiderme au derme sous-jacent et contribuent à l’intégrité cutanée. Cette protéine de la matrice extracellulaire participe à l’assemblage et à la stabilité de la membrane basale grâce à des interactions avec les laminines, le collagène de type IV et d’autres protéines de la jonction dermo-épidermique, reliant l’organisation de la matrice à l’adhérence cellule–matrice et à la mécanotransduction. L’altération de la fonction de COL7A1 est fortement associée à des phénotypes héréditaires de fragilité cutanée, notamment l’épidermolyse bulleuse dystrophique, ce qui en fait un locus largement étudié en biologie épithéliale et en remodelage matriciel. COL7A1 est également utilisé comme point d’entrée moléculaire pour explorer les processus de réparation des plaies, le dialogue kératinocyte–fibroblaste et la dynamique de la matrice extracellulaire dans des modèles cellulaires humains.
COL7A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL7A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL7A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL7A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL7A1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.