Plasmide CRISPR d'Activation (h) COL6A3: sc-402899-ACT

COL6A3 code la chaîne alpha-3 du collagène de type VI, un composant clé de la matrice extracellulaire qui s’assemble en microfibrilles perlées soutenant l’architecture tissulaire et la mécanotransduction. Les matrices riches en COL6A3 influencent l’adhésion cellulaire, la migration et les signaux de survie via des voies liées aux intégrines et aux adhésions focales, façonnant l’organisation stromale et le remodelage extracellulaire. Une expression dérégulée de COL6A3 et des altérations du réseau de collagène VI sont associées à des programmes de remodelage de type fibrotique et à des changements dans la composition du microenvironnement tumoral, et des variants dans les gènes du collagène VI ont été liés à des phénotypes héréditaires du tissu conjonctif et neuromusculaires. En tant que gène structural de la matrice avec des interactions de signalisation, COL6A3 est largement utilisé pour étudier l’assemblage de la MEC, les interactions stroma–épithélium et les réponses de remodelage à des signaux inflammatoires ou mécaniques.

COL6A3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COL6A3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COL6A3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COL6A3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COL6A3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COL6A3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COL6A3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COL6A3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COL6A3 dans les cellules tumorales présentant une expression de COL6A3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.