Plasmide Double Nickase (h) COL6A1: sc-401069-NIC

COL6A1 code la chaîne alpha-1 du collagène de type VI, un composant clé de la matrice extracellulaire (MEC) qui s’assemble en microfibrilles perlées et contribue à l’organisation des réseaux de collagène ainsi que des matrices adjacentes aux membranes basales. Par ses interactions avec les intégrines et d’autres récepteurs de la MEC, COL6A1 participe à l’adhérence cellulaire, à la mécanotransduction et à la régulation de l’architecture tissulaire, en influençant des programmes de signalisation tels que les voies des adhésions focales et des interactions MEC–récepteur. Une expression ou une structure altérée de COL6A1 peut perturber l’intégrité de la matrice et la communication cellule–matrice, avec des implications pour l’homéostasie des tissus conjonctifs et la biologie neuromusculaire. En conséquence, COL6A1 est fréquemment étudié dans des modèles de remodelage matriciel de type fibrosant, de dysfonction de la MEC associée aux myopathies et de régulation stromale des phénotypes cellulaires.

COL6A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL6A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL6A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL6A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL6A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.