Plasmide Double Nickase (h) COL5A1: sc-401579-NIC

COL5A1 code la chaîne alpha 1 du collagène de type V, un collagène fibrillaire quantitativement minoritaire mais essentiel sur le plan fonctionnel, qui régule la fibrillogenèse du collagène et contrôle le diamètre ainsi que l’organisation des fibres de collagène de type I/V dans la matrice extracellulaire. Par son rôle dans l’assemblage de la matrice, COL5A1 influence la signalisation cellule–matrice, la résistance mécanique des tissus et les processus de remodelage, en interaction avec l’adhésion médiée par les intégrines et les voies qui gouvernent le comportement des fibroblastes. Une altération de la fonction ou de l’expression de COL5A1 est associée à des maladies héréditaires du tissu conjonctif, notamment le syndrome d’Ehlers–Danlos classique, et fait l’objet d’études fréquentes dans le contexte de la mécanique de la peau et des tendons, de l’intégrité vasculaire et de la dysrégulation de la matrice. En tant que déterminant structurel de la MEC, il est également pertinent pour explorer comment l’architecture du collagène module le développement, la réparation des plaies et les contributions stromales aux phénotypes pathologiques.

COL5A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL5A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL5A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL5A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL5A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.