Plasmide Double Nickase (h) COL4A1: sc-401792-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) COL4A1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide COL4A1 Double Nickase (h) et le plasmide COL4A1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant COL4A1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: COL4A1 Antibody (5E10): sc-517572
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) COL4A1 | sc-401792-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) COL4A1 | sc-401792-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A1 code la chaîne alpha‑1 du collagène de type IV, un composant structural central des membranes basales, qui s’assemble avec COL4A2 en réseaux de collagène IV afin de soutenir l’intégrité des tissus et la stabilité de la microvascularisation. Cette charpente de matrice extracellulaire contribue à organiser les interactions cellule–matrice qui déterminent la polarité des cellules épithéliales et endothéliales, régulent la perméabilité et influencent la mécanotransduction via une signalisation couplée aux intégrines. La fonction de COL4A1 s’inscrit à l’interface de l’assemblage de la membrane basale, de l’organisation de la matrice extracellulaire et de programmes angiogéniques qui conditionnent la maturation des vaisseaux et l’homéostasie tissulaire. Une dérégulation ou des variations pathogènes de COL4A1 sont associées à des atteintes des petits vaisseaux et à des défauts multisystémiques de la membrane basale, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie vasculaire, de la fonction de barrière et de phénotypes cellulaires dépendants de la matrice.
COL4A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL4A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL4A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL4A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL4A1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.