Plasmide CRISPR d'Activation (h) COL4A1: sc-401792-ACT

COL4A1 code la chaîne α1 du collagène de type IV, un composant structurel essentiel des membranes basales qui s’assemble en réseaux hétérotrimériques soutenant l’architecture tissulaire et la fonction de barrière. Par ses interactions avec les laminines, les nidogènes, le perlecan et les intégrines, COL4A1 influence l’organisation de la matrice extracellulaire, la mécanotransduction et les programmes d’adhérence cellulaire qui façonnent la stabilité vasculaire et le développement des organes. L’altération de l’intégrité des membranes basales dépendante de COL4A1 est associée à des atteintes des petits vaisseaux et à des phénotypes multisystémiques du tissu conjonctif, reflétant son rôle central dans l’homéostasie microvasculaire. En tant que gène de matrice des membranes basales, COL4A1 est fréquemment étudié en biologie endothéliale, dans le remodelage lié à la fibrose et dans les voies de signalisation de la matrice extracellulaire.

COL4A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COL4A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COL4A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COL4A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COL4A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COL4A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COL4A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COL4A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COL4A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de COL4A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.