Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL23A1 (h): sc-413896

Présentation

COL23A1 code le collagène de type XXIII chaîne alpha 1, un collagène transmembranaire enrichi à la surface cellulaire, où il contribue à l’organisation de la matrice extracellulaire et à l’adhésion cellule–matrice. En influençant les interactions avec les composants de la membrane basale et les complexes associés aux intégrines, COL23A1 peut moduler des processus liés à l’architecture épithéliale, à la migration et au remodelage tissulaire. Une expression altérée de COL23A1 a été rapportée dans de multiples contextes liés aux cancers et à la fibrose, ce qui soutient son intérêt comme marqueur et nœud mécanistique dans l’étude de l’invasion, du potentiel métastatique et du remodelage stromal. En tant que collagène associé à la membrane, il constitue un point d’entrée pertinent pour examiner comment les signaux de la MEC péricellulaire façonnent la signalisation et le comportement cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL23A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COL23A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COL23A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COL23A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL23A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COL23A1 pour l'étude de la signalisation de COL23A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COL23A1 essentiels à la fonction de COL23A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COL23A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL23A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COL23A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COL23A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL23A1 plasmide HDR (h) et le COL23A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COL23A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COL23A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.