COL18A1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402281

Descripción general

COL18A1 codifica el colágeno XVIII, un colágeno multiplexina asociado a la membrana basal que contribuye a la organización de la matriz extracelular y a la compartimentación tisular. El procesamiento proteolítico de su región C-terminal genera endostatina, un fragmento bioactivo que modula el comportamiento de las células endoteliales y la señalización angiogénica mediante interacciones con proteoglucanos de heparán sulfato e integrinas. A través de sus funciones en la integridad de la membrana basal y la homeostasis vascular, COL18A1 influye en la adhesión y migración celular, así como en las señales del microambiente que moldean el desarrollo y la remodelación de heridas. La alteración genética de COL18A1 se asocia con fenotipos del desarrollo y oculares, y se estudia con frecuencia en el contexto de la angiogénesis, la fibrosis y la biología del microambiente tumoral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO COL18A1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COL18A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COL18A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COL18A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COL18A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COL18A1 para la investigación de la señalización de COL18A1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de COL18A1 críticos para la función de COL18A1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COL18A1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido COL18A1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido COL18A1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COL18A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COL18A1 (h) y el plásmido HDR COL18A1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COL18A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COL18A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.