ClpP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424769

Übersicht

Clpp kodiert die mitochondriale, ATP-abhängige caseinolytische Peptidase-Untereinheit ClpP, eine Serinprotease, die mit der ClpX-Unfoldase zusammenwirkt, um geschädigte oder fehlgefaltete Proteine zu entfernen und die Proteostase in der Matrix aufrechtzuerhalten. Diese Qualitätskontrollachse unterstützt die Kapazität der oxidativen Phosphorylierung, begrenzt proteotoxischen und oxidativen Stress und beeinflusst die Signalgebung der mitochondrialen Unfolded-Protein-Response (mtUPR). Die ClpP-Aktivität ist mit Signalwegen verknüpft, die den Energiestoffwechsel, die mitochondriale Biogenese und stressadaptive Transkriptionsprogramme steuern. Eine dysregulierte CLPP-Funktion wurde mit Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht und wird häufig in Modellen der Neurodegeneration, metabolischer Erkrankungen und der krebsassoziierten Umprogrammierung mitochondrialer Funktionen untersucht.

Das ClpP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Clpp-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Clpp-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Clpp nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ClpP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Clpp-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ClpP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Clpp-Exone abzielen, die für die ClpP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Clpp-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ClpP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ClpP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Clpp-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ClpP HDR-Plasmid (m) und ClpP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Clpp-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Clpp-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.