Plásmido Doble Nickase (m) Clock: sc-419693-NIC

El gen **Clock** del ratón codifica un factor de transcripción **PAS** de tipo **hélice–bucle–hélice básico (bHLH)** que forma un heterodímero con **ARNTL/BMAL1** para impulsar la expresión de los genes centrales del reloj circadiano a través de elementos **E-box**. La actividad de **CLOCK–BMAL1** coordina la regulación por retroalimentación mediante las proteínas **PER** y **CRY** y acopla la transcripción rítmica con la remodelación de la cromatina, el control metabólico y la sincronización del ciclo celular. A través de la comunicación cruzada con vías como la señalización **cAMP/CREB**, la señalización por **glucocorticoides** y las redes de **receptores nucleares**, **Clock** influye en la homeostasis energética y en las respuestas al estrés. En entornos de investigación, la disfunción circadiana que involucra a **CLOCK** se ha vinculado con fenotipos del ciclo sueño–vigilia, rasgos relacionados con el síndrome metabólico, inflamación y programas transcripcionales asociados al cáncer.

Clock El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Clock en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Clock. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Clock. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Clock alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.