Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Clock Plasmide Double Nickase (m): sc-419693-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Clock Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Clock Double Nickase Plasmid (m) e il Clock Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Clock. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Clock Antibody (C-8): sc-271603
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Clock Plasmide Double Nickase (m) | sc-419693-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Clock Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419693-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Clock codifica un fattore di trascrizione di base helix–loop–helix PAS che forma un eterodimero con ARNTL/BMAL1 per guidare l’espressione dei geni chiave del ritmo circadiano tramite elementi E-box. L’attività di CLOCK–BMAL1 coordina una regolazione a feedback attraverso le proteine PER e CRY e collega la trascrizione ritmica al rimodellamento della cromatina, al controllo metabolico e alla tempistica del ciclo cellulare. Attraverso il crosstalk con vie quali la segnalazione cAMP/CREB, la segnalazione dei glucocorticoidi e le reti dei recettori nucleari, Clock influenza l’omeostasi energetica e le risposte allo stress. Un’alterata funzione circadiana che coinvolge CLOCK è stata collegata, in ambito di ricerca, a fenotipi sonno–veglia, tratti correlati alla sindrome metabolica, infiammazione e programmi trascrizionali associati al cancro.
Clock Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Clock nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Clock. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Clock. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Clock interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.