Plásmido CRISPR de Activación (h) Clock: sc-401261-ACT

El gen humano **CLOCK** codifica un factor de transcripción básico de hélice-bucle-hélice con dominio PAS que forma un heterodímero con **ARNTL/BMAL1** para impulsar la expresión génica circadiana mediante elementos reguladores tipo **E-box**. Este oscilador central regula la transcripción rítmica de vías que controlan el metabolismo, la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la señalización neuroendocrina, conectando las señales de la hora del día con la homeostasis celular. Los programas dependientes de CLOCK influyen en el estado de la cromatina y en la salida transcripcional en distintos tejidos, configurando ritmos fisiológicos coordinados. La actividad desregulada de CLOCK y la desalineación circadiana se han asociado con fenotipos del sueño y del estado de ánimo, disfunción metabólica y estados proliferativos alterados relevantes para la biología de enfermedades complejas.

Clock El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CLOCK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Clock El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CLOCK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CLOCK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Clock. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CLOCK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Clock en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Clock en células tumorales con expresión de CLOCK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.