Plasmide CRISPR/Cas9 KO CLK1 (m): sc-419688

Présentation

Clk1 code la kinase 1 de type CDC (CLK1), une protéine kinase à double spécificité qui phosphoryle les facteurs d’épissage riches en sérine/arginine (SR) et contribue à contrôler la dynamique du spliceosome. En modulant l’épissage alternatif et la maturation du pré-ARNm, CLK1 participe à des programmes transcriptionnels qui régissent la progression du cycle cellulaire, la différenciation et l’expression génique adaptative au stress. L’activité de CLK1 s’articule avec des réseaux de signalisation qui ajustent le traitement de l’ARN, notamment des voies sensibles au stress cellulaire et aux signaux de croissance, influençant ainsi la diversité du protéome. Une activité dérégulée des kinases de la famille CLK et des profils d’épissage aberrants ont été impliqués dans plusieurs phénotypes liés à des maladies, faisant de Clk1 chez la souris un nœud pertinent pour des études mécanistiques du traitement de l’ARN au cours du développement et dans la pathologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CLK1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Clk1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Clk1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Clk1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CLK1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Clk1 pour l'étude de la signalisation de CLK1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Clk1 essentiels à la fonction de CLK1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Clk1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CLK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CLK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Clk1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CLK1 plasmide HDR (m) et le CLK1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Clk1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Clk1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.