CLIP4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413231-ACT

CLIP4（CAP-Glyドメイン含有リンカータンパク質4）は、チューブリンおよび微小管プラス端ネットワークとの相互作用を介して、微小管ダイナミクスと細胞内構造の組織化を調節することに関与すると考えられる、細胞骨格関連因子をコードします。微小管の安定性や細胞骨格の空間的な協調性に影響を与えることで、CLIP4は小胞輸送、細胞極性、有糸分裂の進行などの過程に影響し得ます。発現変化や細胞骨格制御の破綻は、異常な細胞遊走や増殖性表現型と結び付くことが多く、CLIP4はがん生物学や細胞骨格リモデリングを伴う他の疾患における作用機序研究の関連標的となります。さらにCLIP4の研究は、微小管制御と、細胞形状や接着を調整するシグナル伝達プログラムとの間の経路クロストークの解明にも寄与します。

CLIP4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CLIP4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CLIP4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CLIP4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCLIP4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CLIP4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCLIP4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCLIP4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCLIP4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCLIP4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。