CLCA1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402998-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CLCA1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CLCA1 Double Nickase Plasmid (h) e il CLCA1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CLCA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CLCA1 Antibody (E-4): sc-271156
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CLCA1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402998-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLCA1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402998-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLCA1 (chloride channel accessory 1) codifica una glicoproteina secreta e associata alla membrana che modula la conduttanza al cloruro negli epiteli e la fisiologia del muco, in particolare nella mucosa gastrointestinale e delle vie aeree. È comunemente associato alla differenziazione delle cellule caliciformi e alla regolazione della produzione di mucine, integrandosi con programmi infiammatori e di rimodellamento epiteliale che determinano la funzione di barriera. Un’espressione alterata di CLCA1 è stata osservata in condizioni infiammatorie delle mucose e nelle neoplasie epiteliali, dove viene spesso utilizzato come marcatore dello stato di differenziazione e dei cambiamenti nella composizione delle linee cellulari secretorie. Queste caratteristiche rendono CLCA1 un bersaglio utile per studiare la regolazione del trasporto ionico epiteliale, l’omeostasi del muco e le reti trascrizionali associate all’infiammazione.
CLCA1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CLCA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CLCA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CLCA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CLCA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.