Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
claudin-6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403405
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- claudin-6 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico claudin-6, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: claudin-6 Anticuerpo (A-4): sc-393671
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
claudin-6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403405 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CLDN6 codifica la claudina-6, una proteína de uniones estrechas con cuatro pasos transmembrana que contribuye a la formación de la barrera epitelial y al control de la permeabilidad paracelular mediante el ensamblaje de hebras basadas en claudinas. Al regular la adhesión célula–célula, la polaridad y la señalización asociada a las uniones, la claudina-6 puede influir en procesos vinculados con la diferenciación epitelial, la migración y la organización tisular. Se ha informado de una expresión alterada de CLDN6 en múltiples contextos tumorales, donde a menudo se estudia en relación con la remodelación de las uniones, los cambios del estado epitelial y las vías asociadas a la invasión. Dado que CLDN6 está regulado durante el desarrollo y con frecuencia es limitado en tejidos adultos, también se utiliza como marcador para analizar programas de linaje y fenotipos de uniones en modelos celulares humanos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO claudin-6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CLDN6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CLDN6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CLDN6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína claudin-6.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CLDN6 para la investigación de la señalización de claudin-6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CLDN6 críticos para la función de claudin-6
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CLDN6 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido claudin-6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido claudin-6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CLDN6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR claudin-6 (h) y el plásmido HDR claudin-6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CLDN6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CLDN6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.