claudin-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-401756-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das claudin-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- claudin-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und claudin-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CLDN3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: claudin-3: sc-517546
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
claudin-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401756-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
claudin-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401756-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes **CLDN3** kodiert **Claudin-3**, eine vierfach die Membran durchspannende Komponente der Tight-Junction-Stränge, die dazu beiträgt, die parazelluläre Permeabilität und die Integrität der epithelialen Barriere zu bestimmen. Claudin-3 ist an Programmen der apikal-basolateralen Polarität beteiligt und vermittelt einen junctionalen Crosstalk mit Adherens Junctions sowie Signalnetzwerken, die mit dem Umbau des Zytoskeletts verknüpft sind, darunter Signalwege, die von GTPasen der Rho-Familie und von Wachstumsfaktorsignalen beeinflusst werden. Eine veränderte CLDN3-Expression oder -Lokalisation wird häufig bei epithelialen Dysplasien und Karzinomen beobachtet, wo die Störung der Tight Junctions zu Veränderungen des Differenzierungszustands, zu invasionsassoziierten Phänotypen und zur Gewebearchitektur beiträgt. CLDN3 ist zudem relevant für Untersuchungen der mukosalen Barrierefunktion und von Entzündungen, bei denen die Zusammensetzung der Zell-Zell-Kontakte die Permeabilität und die Immunexposition moduliert.
claudin-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CLDN3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CLDN3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CLDN3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CLDN3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.