claudin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400609

Übersicht

CLDN1 kodiert Claudin-1, eine integrale Membrankomponente der Tight-Junction-Stränge, die die Integrität der epithelialen Barriere, die parazelluläre Permeabilität und die apiko-basale Polarität reguliert. Claudin-1 ist an der Organisation von Zellkontakten und an Signalprozessen beteiligt, unter anderem durch Interaktionen mit Gerüstproteinen wie ZO-1; dadurch beeinflusst es die Zytoskelettdynamik sowie Signalwege, die mit der epithelialen Homöostase verknüpft sind, einschließlich Wnt/β-Catenin und EMT-assoziierten Programmen. Eine veränderte Expression oder Lokalisation von CLDN1 wird mit Barrierefunktionsstörungen und entzündlichen Prozessen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext epithelialer Transformation, Invasion und Metastasierung bei verschiedenen Karzinomen untersucht. Als Determinante von Zellkontakten wird Claudin-1 breit als Marker und mechanistischer Knotenpunkt genutzt, um adhäsionsabhängige Signalgebung und Gewebearchitektur zu untersuchen.

Das claudin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CLDN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CLDN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CLDN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die claudin-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CLDN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der claudin-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CLDN1-Exone abzielen, die für die claudin-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CLDN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom claudin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom claudin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CLDN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das claudin-1 HDR-Plasmid (h) und claudin-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CLDN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CLDN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.