Clathrin Light Chain B/CLTB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404228

Descripción general

CLTB codifica la cadena ligera B de clatrina, una subunidad reguladora del triskelion de clatrina que modula el ensamblaje de la cubierta, la dinámica de la red y las interacciones con adaptadores durante la endocitosis mediada por clatrina. A través de su función en la formación de vesículas en la membrana plasmática y en la red trans-Golgi, CLTB favorece la internalización de receptores, el ciclo de vesículas sinápticas y la clasificación de proteínas de membrana que influyen en la señalización posterior y en la captación de nutrientes. El tráfico dependiente de CLTB se integra con el reciclaje endosomal y el direccionamiento hacia lisosomas, determinando el tiempo de residencia de los receptores y la sensibilidad de las vías. La disfunción de la cubierta de clatrina y del flujo endocítico se asocia con frecuencia a alteraciones en la transducción de señales y en fenotipos de proteostasis, estudiados en biología del cáncer y en modelos de neurodegeneración.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Clathrin Light Chain B/CLTB (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CLTB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CLTB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CLTB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Clathrin Light Chain B/CLTB.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CLTB para la investigación de la señalización de Clathrin Light Chain B/CLTB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CLTB críticos para la función de Clathrin Light Chain B/CLTB
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CLTB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CLTB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Clathrin Light Chain B/CLTB (h) y el plásmido HDR Clathrin Light Chain B/CLTB (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CLTB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CLTB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.