Plasmide CRISPR d'Activation (h) Chr-B: sc-401478-ACT

CHGB code la chromogranine B (Chr-B), une protéine acide des granules de sécrétion, enrichie dans les cellules neuroendocrines et neuronales, qui soutient la sécrétion régulée et la biogenèse des vésicules à cœur dense. Chr-B participe au tri et à la maturation du contenu des granules, contribuant à l’efficacité de l’exocytose couplée à un stimulus et à la libération d’hormones peptidiques/neuropeptides. Par ses rôles dans l’homéostasie de la voie sécrétoire, CHGB est fréquemment étudié dans des contextes impliquant la différenciation neuroendocrine, la fonction de vésicules de type synaptique et la signalisation dépendante du calcium liée au trafic vésiculaire. Des altérations de l’expression ou du processing de CHGB ont été examinées dans des troubles caractérisés par une dysfonction de la sécrétion et un déséquilibre neuroendocrinien, offrant un point d’entrée moléculaire pour des études mécanistiques dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

Chr-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHGB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Chr-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHGB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHGB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Chr-B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHGB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Chr-B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Chr-B dans les cellules tumorales présentant une expression de CHGB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.