Plasmide Double Nickase (h) ChoK: sc-403793-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ChoK correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ChoK Double Nickase (h) et le plasmide ChoK Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CHKA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ChoK Antibody (B-8): sc-376489
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ChoK | sc-403793-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ChoK | sc-403793-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHKA code la choline kinase alpha (ChoK), l’enzyme limitante qui phosphoryle la choline en phosphocholine dans la voie de Kennedy de biosynthèse de la phosphatidylcholine. En contrôlant les réserves de phosphocholine, ChoK influence la biogenèse membranaire, la signalisation lipidique et le remodelage métabolique qui soutiennent la prolifération et l’adaptation au stress. L’activité de CHKA interagit avec les programmes de croissance liés à PI3K–AKT et à la MAPK via le métabolisme plus large des phospholipides, affectant la fonction des organites et le trafic dépendant des membranes. La dérégulation de CHKA et l’élévation de la phosphocholine ont été associées à une homéostasie lipidique altérée dans la biologie des cancers et dans d’autres troubles caractérisés par une synthèse membranaire et une signalisation aberrantes.
ChoK Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHKA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHKA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHKA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHKA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.