Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CHIP/STUB1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400815-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CHIP/STUB1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CHIP/STUB1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CHIP/STUB1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf STUB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CHIP/STUB1: sc-133066
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CHIP/STUB1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400815-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CHIP/STUB1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400815-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STUB1 kodiert CHIP, eine U-Box-E3-Ubiquitin-Ligase und ein Co-Chaperon, das die Erkennung von HSP70/HSP90-Klientenproteinen mit deren Ubiquitinierung und dem proteasomalen Abbau koppelt und so die Proteinqualitätskontrolle reguliert. CHIP/STUB1 ist zudem in Autophagie-Wege und Stressantwort-Signalgebung eingebunden, um die Proteostase unter Bedingungen wie Hitzeschock und oxidativem Stress aufrechtzuerhalten. Durch die Kontrolle der Stabilität fehlgefalteter oder geschädigter Proteine beeinflusst es die zelluläre Homöostase, die mitochondriale Funktion und apoptosisbezogene Prozesse. Eine Fehlregulation oder pathogene Variation in STUB1 wird mit Neurodegeneration und Ataxie-Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch es einen intensiv untersuchten Knotenpunkt in proteinopathie-relevanten Signalwegen darstellt.
CHIP/STUB1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des STUB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von STUB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die STUB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit STUB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.