Plasmide CRISPR/Cas9 KO CHDH (m): sc-432328

Présentation

Chdh code la choline déshydrogénase (CHDH), une enzyme de la membrane interne mitochondriale qui catalyse l’oxydation de la choline en bêtaïne aldéhyde, soutenant la production en aval de bêtaïne et le métabolisme à un carbone. Par son lien avec la disponibilité des donneurs de méthyle et l’équilibre des osmolytes, CHDH influence l’homéostasie des phospholipides, la bioénergétique mitochondriale et les réponses cellulaires au stress métabolique et oxydatif. Chez la souris, une perturbation de l’oxydation de la choline peut affecter la gestion hépatique des lipides et l’équilibre énergétique systémique, reliant les voies associées à CHDH à des phénotypes métaboliques pertinents pour la stéatose hépatique et des traits de risque cardiométabolique connexes. Ces fonctions font de CHDH un nœud utile pour étudier le métabolisme mitochondrial, la régulation dépendante de la méthylation et les interactions nutriment–gène dans la physiologie des mammifères.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CHDH (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Chdh dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Chdh, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Chdh à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CHDH.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Chdh pour l'étude de la signalisation de CHDH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Chdh essentiels à la fonction de CHDH
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Chdh pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CHDH plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CHDH plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Chdh. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CHDH plasmide HDR (m) et le CHDH (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Chdh pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Chdh définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.