Plasmide CRISPR d'Activation (h) CENP-C: sc-403000-ACT

CENPC code la protéine centromérique C (CENP‑C), un composant essentiel du kinétochore interne qui se lie à la chromatine centromérique et aide à organiser le réseau constitutif associé au centromère, indispensable à une ségrégation correcte des chromosomes. CENP‑C contribue à l’assemblage du kinétochore et à l’attachement aux microtubules pendant la mitose, en soutenant la signalisation du point de contrôle du fuseau ainsi que la cohésion et la séparation fidèles des chromatides sœurs. La perturbation ou la dérégulation des protéines du centromère et du kinétochore, dont CENP‑C, est associée à l’instabilité chromosomique et à l’aneuploïdie, des processus fréquemment étudiés en biologie du cancer et dans le maintien du génome. En tant que facteur central du centromère, CENP‑C est largement utilisée comme marqueur et comme point d’entrée mécanistique pour l’étude de la progression mitotique, de l’identité centromérique et de la régulation épigénétique de l’hérédité chromosomique.

CENP-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CENPC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CENP-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CENPC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CENPC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CENP-C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CENPC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CENP-C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CENP-C dans les cellules tumorales présentant une expression de CENPC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.