CEL CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403176-ACT

Das humane **CEL**-Gen kodiert die Carboxylesterlipase, ein sezerniertes lipolytisches Enzym, das vor allem für die Hydrolyse von Cholesterinestern und Triglyceriden im Darmlumen bekannt ist und zur Resorption von Nahrungsfetten beiträgt. Die CEL-Aktivität greift in Prozesse des Lipidtransports und des Lipoprotein-Remodelings ein, die die zelluläre Cholesterinhomöostase und metabolische Signalwege beeinflussen. Eine Expression wurde außerdem im exokrinen Pankreasgewebe (Azini) und in Milch beschrieben, was CEL mit der Verdauungsphysiologie und der Nährstoffverarbeitung in unterschiedlichen Entwicklungsphasen verknüpft. Genetische Varianten oder eine dysregulierte Expression von **CEL** wurden mit veränderten Phänotypen des Lipidstoffwechsels und Pankreasdysfunktionen in Verbindung gebracht und bieten damit einen mechanistischen Ansatzpunkt für Studien zu metabolischen und exokrinen Signalwegen.

CEL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CEL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CEL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CEL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CEL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CEL-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CEL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CEL-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CEL-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CEL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.