Plasmide CRISPR d'Activation (h) CEACAM1: sc-417666-ACT

CEACAM1 (carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1) est une glycoprotéine de surface cellulaire humaine appartenant à la superfamille des immunoglobulines, qui assure des adhésions homophiles et hétérophiles et régule la signalisation via ses motifs ITIM cytoplasmiques. Elle participe à la polarisation épithéliale, à l’organisation des jonctions serrées et au contrôle de la croissance dépendant du contact, tout en modulant l’activation des cellules immunitaires et les réponses inflammatoires par des voies dépendantes de SHP. CEACAM1 s’inscrit à l’interface de programmes de communication cellule–cellule qui influencent la migration, le comportement angiogénique et le remodelage tissulaire, reliant ainsi son niveau d’expression à la biologie tumorale et à la régulation immunitaire. Une expression dérégulée de CEACAM1 a été rapportée dans de nombreux types de cancers et contextes inflammatoires, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier la signalisation couplée à l’adhésion et les interactions avec le microenvironnement.

CEACAM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CEACAM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CEACAM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CEACAM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CEACAM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CEACAM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CEACAM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CEACAM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CEACAM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CEACAM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.