Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cdt1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401014-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cdt1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cdt1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cdt1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cdt1: sc-365305
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cdt1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401014-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdt1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401014-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **CDT1** kodiert Cdt1, einen essenziellen Faktor der Replikationslizenzierung, der während der späten Mitose und in G1 die MCM2–7-Helikase auf das Chromatin lädt, um Prä-Replikationskomplexe zu etablieren und eine DNA-Replikation nur einmal pro Zellzyklus sicherzustellen. Die Cdt1-Aktivität wird streng durch CDK-abhängige Phosphorylierung und ubiquitinvermittelte Proteolyse über die SCF- sowie CRL4–DDB1–Cdt2-Wege reguliert und verknüpft die Lizenzierung von Replikationsursprüngen mit Checkpoint-Signalen und dem Chromatinkontext. Eine fehlregulierte Expression oder Stabilisierung von **CDT1** fördert Re-Replikation, Replikationsstress und DNA-Schadensantworten und verbindet Cdt1 mit Phänotypen genomischer Instabilität, wie sie in der Krebsbiologie und anderen proliferativen Erkrankungen untersucht werden. Als Knotenpunkt der Kontrolle des Eintritts in die S-Phase wird Cdt1 häufig zusammen mit Geminin (GMNN), ORC-Komponenten und den ATR/CHK1-Signalwegen analysiert, um Replikations-Timing und Zellzyklusprogression zu untersuchen.
Cdt1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.