Plásmido Doble Nickase (m) Cdk5: sc-419602-NIC

La quinasa dependiente de ciclina 5 (Cdk5) de ratón es una quinasa de serina/treonina dirigida a prolina que se vuelve catalíticamente activa mediante su asociación con cofactores no ciclínicos como p35 (Cdk5r1) y p39 (Cdk5r2). Cdk5 regula la migración neuronal, el crecimiento de neuritas, la dinámica de las vesículas sinápticas y la remodelación del citoesqueleto a través de la fosforilación de sustratos en las redes de microtúbulos y actina, intersectando con la señalización MAPK y con vías de quinasas independientes del ciclo celular. La desregulación de la actividad de Cdk5 se ha vinculado a fenotipos neurodegenerativos y del neurodesarrollo por la fosforilación alterada de tau y otros sustratos neuronales, así como por una homeostasis sináptica deteriorada. Además de su papel en la biología del sistema nervioso, la señalización de Cdk5 contribuye a las respuestas al estrés y a la regulación dependiente del contexto de la adhesión y la motilidad, lo que respalda estudios mecanísticos en múltiples tipos celulares.

Cdk5 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cdk5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cdk5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cdk5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cdk5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.