Cdk5 Double Nickase Plasmid (h): sc-400161-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cdk5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cdk5 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cdk5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDK5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cdk5: sc-6247
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cdk5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400161-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdk5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400161-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die Cyclin-abhängige Kinase 5 (CDK5) kodiert Cdk5, eine prolin-gerichtete Serin/Threonin-Kinase, die durch nicht-cyclische Cofaktoren wie p35 (CDK5R1) und p39 (CDK5R2) aktiviert wird. In humanen Zellen reguliert Cdk5 über Substrate, die mit MAPK-, PI3K/AKT- und Stressantwort-Signalwegen verknüpft sind, die neuronale Entwicklung, synaptische Signalübertragung, Zytoskelett-Remodellierung, Vesikeltransport sowie zellzyklusunabhängige Phosphorylierungskaskaden. Eine dysregulierte Cdk5-Aktivität und aberrante Substratphosphorylierung wurden mit neurodegenerativen Prozessen, einschließlich Tau-Pathologie, sowie mit veränderten Migrations- und Überlebensprogrammen in mehreren Krankheitskontexten in Verbindung gebracht. Da CDK5 sowohl die Signaldynamik als auch die strukturelle Plastizität beeinflusst, wird es häufig in Modellen der Neurobiologie, der DNA-Schadensantwort und des durch Kinase-Netzwerke getriebenen Pathway-Cross-Talks untersucht.
Cdk5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDK5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDK5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDK5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDK5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.