Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cdk3: sc-400846-ACT

CDK3 code la kinase 3 dépendante des cyclines (Cdk3), une kinase sérine/thréonine qui contribue au contrôle du cycle cellulaire en s’associant à des cyclines afin de réguler les transitions au cours de G1 et l’entrée en phase S. Cdk3 a été impliquée dans des événements de phosphorylation qui modulent des programmes transcriptionnels, notamment la régulation de l’expression de gènes sensibles au cycle cellulaire via des voies telles que la signalisation RB/E2F. Une altération de l’activité ou de l’expression de CDK3 peut affecter la prolifération et le contrôle des points de contrôle, des processus fréquemment perturbés dans le cancer et d’autres états hyperprolifératifs. Par conséquent, CDK3 est couramment étudié dans le contexte de la dynamique du cycle cellulaire, des réseaux de signalisation oncogénique et de la régulation transcriptionnelle.

Cdk3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDK3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cdk3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDK3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDK3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cdk3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDK3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cdk3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cdk3 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDK3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.