Cdc42EP4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-408523-LAC

CDC42EP4 kodiert Cdc42EP4, ein Cdc42‑Effektorprotein aus der Borg/CEP‑Familie, das die Rho‑GTPase‑Signalübertragung mit dem Umbau des Aktin- und Septin-Zytoskeletts koppelt. Durch die Koordination der Filamentorganisation und kontraktiler Strukturen trägt Cdc42EP4 zur Kontrolle von Zellform, Adhäsion, Polarität und Migrationsprogrammen bei, die für die Gewebemorphogenese und die zelluläre Mechanobiologie zentral sind. Fehlregulierte Outputs des CDC42‑Signalwegs und eine Umorganisation des Zytoskeletts werden häufig mit invasivem Verhalten, veränderten Interaktionen mit dem Stroma und weiteren Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Krebs- und Entzündungsforschung relevant sind. Als Readout‑Knoten downstream von Cdc42 bietet Cdc42EP4 einen gut handhabbaren Ansatzpunkt, um die Zytoskelettarchitektur und signalabhängige Veränderungen der Motilität zu untersuchen.

Cdc42EP4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CDC42EP4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Cdc42EP4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CDC42EP4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Cdc42EP4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CDC42EP4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.