Cdc25A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400345

Panoramica

CDC25A codifica la fosfatasi umana a doppia specificità Cdc25A, un attivatore chiave delle chinasi ciclina-dipendenti che promuove la progressione del ciclo cellulare defosforilando i residui inibitori delle CDK alla transizione G1/S e durante l’ingresso in fase S. La sua attività è strettamente controllata dai segnali dei checkpoint, incluse le vie ATR/ATM–CHK1/CHK2 che regolano la stabilità di CDC25A in risposta a stress replicativo e danno al DNA. Collegando la segnalazione proliferativa alla sorveglianza dell’integrità genomica, Cdc25A influenza la tempistica della replicazione del DNA, il recupero dai checkpoint e la competenza mitotica. Un’espressione o un turnover deregolati di CDC25A sono stati associati a proliferazione aberrante e instabilità genomica, rendendolo un obiettivo frequente negli studi sulla segnalazione oncogenica, sui difetti dei checkpoint e sui meccanismi di malattia guidati dal ciclo cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc25A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDC25A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDC25A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDC25A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cdc25A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDC25A per lo studio della segnalazione di Cdc25A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDC25A critici per la funzione di Cdc25A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDC25A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Cdc25A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Cdc25A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDC25A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Cdc25A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Cdc25A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDC25A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDC25A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.