Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
CD89 Double Nickase Plasmid (h): sc-403014-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD89 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD89 Double-Nickase-Plasmid (h) und CD89 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FCAR abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD89: sc-19680
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD89 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403014-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD89 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403014-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FCAR kodiert CD89 (FcαRI), einen Immunglobulinrezeptor der myeloischen Zelllinie, der IgA bindet und mit der FcR-γ-Kette koppelt, um – abhängig von der Rezeptorkonfiguration – aktivierende oder inhibitorische Signale zu übertragen. Die Bindung an CD89 reguliert Phagozytose, antikörperabhängige zelluläre Zytotoxizität, oxidativen Burst, Zytokinfreisetzung und die Expression inflammatorischer Gene über ITAM-vermittelte Signalwege, an denen Src-Familienkinasen, SYK, PI3K sowie nachgeschaltete NF-κB- und MAPK-Kaskaden beteiligt sind. Dieser Rezeptor wird stark auf Neutrophilen, Monozyten, Makrophagen, Eosinophilen und bestimmten Subpopulationen dendritischer Zellen exprimiert und prägt mukosale und systemische Immunantworten auf opsonisierte Mikroben und Immunkomplexe. Eine fehlregulierte IgA–CD89-Signalübertragung und veränderte FCAR-Expression wurden mit immunkomplexgetriebener Entzündung und myeloider Zelldysfunktion in Verbindung gebracht, die für die Biologie entzündlicher und autoimmuner Erkrankungen relevant sind.
CD89 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FCAR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FCAR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FCAR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FCAR-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.